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巢式聚合酶链式反应

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图解巢式PCR方法

巢式聚合酶链式反应Nested PCR )是对聚合酶链式反应的一种改进,旨在减少意外引物结合位点的扩增导致的产物中的非特异性结合。 [1]

聚合酶链式反应

聚合酶链式反应本身是通过温度介导的DNA聚合酶扩增DNA样品的过程。该产品可用于测序或分析,该过程是许多遗传学研究实验室的重要组成部分,也用于法医和其他人类遗传病例的DNA指纹识别。常规PCR需要与靶DNA末端互补的引物。PCR产生的产物量随反应所经历的温度循环次数而增加。常见的问题是引物与DNA的不正确区域结合,产生意想不到的产物。该问题发生的可能性随PCR循环次数的增加而增大。

引物

巢式聚合酶链式反应涉及两组引物,用于连续两次进行的聚合酶链式反应,第二组引物用于扩增第一批产物中的次级靶标。这样可以在第一轮扩增时进行少量扩增,从而限制非特异性产物。第二组嵌套引物应仅从第一轮扩增中扩增目标产物,而不扩增非特异性产物。这样可以运行更多的总周期,同时最大程度地减少非特异性产物。这对于罕见模板或高背景的PCR非常有用。

参考文献

  1. ^ Elizabeth van Pelt-Verkuil; Alex van Belkum; John P. Hays. Principles and Technical Aspects of PCR Amplification. Springer Science & Business Media. 14 March 2008: 190– [2020-05-24]. ISBN 978-1-4020-6241-4. (原始内容存档于2019-12-15).